歯 の 噛み 合わせ 治し 方 割り箸
RabMAb ® テクノロジー :高性能なウサギ・モノクローナル抗体 RabMAb の概要 RabMAb は、ウサギ由来抗体の優れた抗原親和性と、モノクローナル抗体ならではの安定した品質、双方を兼ね備えた製品です。そのテクノロジーの概要です。 RabMAb ® が選ばれる 8 つの理由 :ウサギ・モノクローナル抗体を使用するメリット RabMAb はバックグラウンドが低いこと、翻訳後修飾の検出に有用であること、免疫組織染色にも最適であることなど、使用する多くのメリットがあります。それらの理由をわかりやすくご紹介します。 RabMAb ® とウサギ免疫系 :なぜウサギ・モノクローナル抗体は高品質なのでしょうか?
つぎに,心筋細胞誘導タンパク質をコードする候補遺伝子として,マウス胎仔期の心筋細胞に特異的に発現し,かつ,心臓形成に重要な遺伝子を選定した.そのためにまず,2009年に開発した,心筋細胞と心臓線維芽細胞とをフローサイトメーターで高純度に分別する方法により,マウス胎仔の心筋細胞に特異的に発現する遺伝子を同定した 2) .この遺伝子発現情報と,その遺伝子をノックアウトしたときのマウス表現型(胎生致死かつ心臓奇形をもつ)の情報を組み合わせ,14の遺伝子を心筋細胞誘導タンパク質の候補遺伝子としてスクリーニングを開始した. アブカムブログ: RabMAb® ポータル. まず,14種類の候補遺伝子すべてをレトロウイルスベクターにより心臓線維芽細胞に遺伝子導入した.その結果,ウイルス導入後1週間で約1. 7%の線維芽細胞がGFPを発現し,心筋細胞へと分化している可能性が示唆された.一方,陰性対照群ではGFPを発現する細胞はまったく観察されなかった.そこで,さらに14の遺伝子から1遺伝子ずつを除いた組合せで遺伝子導入を行ない,GFPの発現を検討した.その結果,14のうち3つの遺伝子(Gata4,Mef2c,Tbx5をコード)の組合せで約17%の線維芽細胞がGFPを発現するようになり,この3つの遺伝子からさらに遺伝子を除くとGFPやほかの心筋細胞マーカーが発現しなくなることにより,Gata4,Mef2c,Tbx5の3つの因子の同時導入が心筋細胞の誘導に必須であることが示唆された.そこで,この線維芽細胞より誘導された心筋様細胞をiCM細胞(induced cardiomyocytes)と名づけた. 2.iCM細胞は心筋細胞に類似した細胞である 得られたiCM細胞と心筋細胞とを比較した.GFPを発現するiCM細胞を免疫染色で観察したところ,たしかにαアクニチン,心筋トロポニンT,心房性ナトリウム利尿ペプチド(ANF)など心筋細胞に特異的なタンパク質を発現しており,また,心筋に特徴的とされる横紋筋構造も観察された.すべての遺伝子の発現パターンをマイクロアレイ法により検討したところ,iCM細胞は心筋細胞に非常に類似した遺伝子発現パターンを示し,逆に,線維芽細胞とはまったく異なっていた. つぎに,細胞のエピジェネティックな状態を確認するため,心筋細胞に特異的な遺伝子のプロモーター領域におけるヒストンメチル化とDNAメチル化を,線維芽細胞,iCM細胞,心筋細胞とで比較検討した.クロマチン免疫沈降(chromatin immunoprecipitation:ChIP)法の結果より,線維芽細胞と比較してiCM細胞ではヒストンメチル化の抑制マーカーであるヒストンH3の27番目のリジン残基のトリメチル化は心筋細胞と同程度まで低下しており,逆に,活性化マーカーであるヒストンH3の4番目のリジン残基のトリメチル化は上昇していた.バイサルファイトシークエンス法の結果より,線維芽細胞と比較してiCM細胞では心筋細胞に特異的な遺伝子のプロモーター領域のDNAの脱メチル化が進行しており,心筋細胞と同じくらいの程度まで低メチル化状態となっていた.
05%トリプシンでも、0. 25%トリプシンでも剥離しにくい傾向にある。 トリプシン処理で剥がれ残る細胞は、スクレーパーで回収したり、あきらめたりしていたが、温感剥離することで、物理的な刺激を与えずに多くの細胞が回収でき、貴重な細胞が無駄にならない。 トリプシン処理では回収率が50%に満たないが、Cepalletでは回収率が90%に向上する。 【培養条件 】 ・通常お使いの培養方法と同じように播種してください。 ・接着性の低い細胞の場合は、細胞外マトリックスで基材をコーティングしてお使いください。 ・基材の特性上、通常の培養基材のコーティングより長めのインキュベーションをおすすめしております。 (低温ではコーティング不良になることがあります) ・培地交換に使用する培地類はあらかじめ37℃で加温したものを使用してください。 ・培地の温度が低下すると細胞が剥離しやすくなるので、長時間の顕微鏡観察は避けてください。 【温感剥離】 1. 細胞を培養した Cepallet® をインキュベーターから出す。 2. 培地をアスピレーターで除去する。 3. 培養表面に、低温 (4℃~室温)の培地を添加する。※添加量は 35 mm dish で 1 mL 4. 幹細胞培養上清液サイトカイン点滴 | おおた内科消化器科クリニック. 室温で 10~30 分間静置する。(細胞種によって、剥離にかかる時間が異なります) 5. P1000 のマイクロピペットで培地をプレート表面に数回流しかけ、チューブに回収する。 6. 必要に応じて 5. の操作を 2, 3 回繰り返す。 7. 遠心分離で上清を除去する。 ※酵素を使用していないので遠心せずに、再播種も可能 8. 回収した細胞は再播種等に用いる。 DICの強み 主な用途 製品ラインナップ
Nature, 433, 647-653 (2005)[ PubMed] Srivastava, D. : Making or breaking the heart: from lineage determination to morphogenesis. Cell, 126, 1037-1048 (2006)[ PubMed] 著者プロフィール 略歴:内科医として勤務ののち,1999年 慶應義塾大学医学部 助手.多くの患者さんを診るうちに心臓病に関する疑問がわき,2000年ごろより基礎研究を開始する.2005年 同大学 医学博士,2007年 米国California大学San Francisco校Gladstone Institute留学を経て,2010年より慶應義塾大学医学部 講師. 研究テーマ:心臓の再生・発生,心臓病の分子基盤の解明. 抱負:多くのすぐれた臨床医科学者を育てたい.基礎研究を臨床につなげたい. © 2010 家田 真樹 Licensed under CC 表示 2. 1 日本